|
|
Využití flowcytometrie pro multiplexové analýzy v klinické biochemii
Babušíková, Lucie ; Tremlová,, Bohuslava (oponent) ; Beňovská,, Miroslava (vedoucí práce)
Diplomová práce pojednává o technice flow cytometrie pro multiplexové analýzy a jejím využitím ve spojení s imunochemickými metodami. V rámci této práce byla provedena klinická studie, která se zabývá sekundární prevencí infarktu myokardu a aterosklerózy u souboru 186 pacientů. V dnešní době představuje infarkt myokardu celosvětový civilizační problém. Řada možných parametrů pro monitorování aterosklerózy představuje ve světě dosud nevyřešenou problematiku. V praktické části této práce jsme prováděli analýzu pomocí xMAP technologie Luminex u nových parametrů (adiponektin, resistin, osteopontin) předpovídajících aterosklerotické onemocnění ve spojitosti s infarktem myokardu. Také jsme chtěli zjistit, jak se tyto parametry změní u pacientů po zvýšení dávky léčebných medikamentů.
|
|
|
Stanovení biologické aktivity rekombinantního proteinu adiponektinu pomocí buněčné kultury
Pernicová, Iva ; Rittich, Bohuslav (oponent) ; Ševčík, Mojmír (vedoucí práce)
Tato diplomová práce se zabývá stanovením biologické aktivity rekombinantního proteinu adiponektinu pomocí buněčné kultury. Nejprve bylo důležité zvládnout práci s buněčnými kulturami konkrétně s linií 3T3-L1. Na základě proliferačních testů byla vybrána koncentrace inaktivovaného séra, která byla používána pro všechny další experimenty. V proliferačním testu byla ověřena stimulace růstu buněk pomocí růstových faktorů HB-EGF, PDGF-BB a bFGF v různých koncentracích. Biologická aktivita adiponektinu poté byla stanovena jako inhibice stimulace růstu s 5 ng/ml PDGF-BB. Test biologické aktivity adiponektinu byl také proveden s lyofilizovaným adiponektinem a růstovým faktorem bFGF (0,1 ng/ml). Lyofilizace neměla vliv na biologickou aktivitu adiponektinu.
|
|
|
Cirkadiánní rytmy v adipocytech a dopady jejich narušení
Zavřelová, Michaela ; Sumová, Alena (vedoucí práce) ; Spišská, Veronika (oponent)
Bakalářská práce se zabývá cirkadiánními rytmy v adipocytech a důsledky jejich narušení. Práce shrnuje současné poznatky vědy, zabývá se mechanismem řízení rytmů na molekulární úrovni, který je tvořený transkripčně translačními zpětnovazebnými smyčkami. Adipocyty řídí metabolismus lipidů prostřednictvím produkce adipokinů, adipogeneze, lipogeneze a lipolýzy. Rešerše se věnuje tomu, jak se hodinové geny zapojují do těchto procesů. Všechny tyto děje, které jsou charakteristické pro tukové buňky, jsou vysoce regulované a geny, které se do nich zapojují, jsou transkripčně aktivovány proteiny hodinových genů. Cirkadiánní rytmy jsou nedílnou součástí našich životů a desynchronizace rytmů mezi hlavním oscilátorem, kterým jsou suprachiasmatická jádra, a periferními adipocyty může vést k metabolické poruše, která dále vede k obezitě, inzulinové rezistenci nebo diabetes 2. typu. Obezita je jedním z největších problémů moderní společnosti a jednou z příčin jejího vzniku jsou právě narušené cirkadiánní rytmy vlivem dnešního životního stylu. Klíčová slova: cirkadiánní rytmy, hodinové geny, adipocyty, obezita, PPARγ, adipogeneze, lipogeneze, lipolýza, leptin, adiponektin
|
|
| |
|
|
Vplyv účinných zložiek rybieho tuku na expresiu vybraných génov v modelovom organizme
Frólo, Michal
Cílem této práce bylo ověřit hypotézu, která předpokládá, že kyselina eikosapentaenová a dokosahexaenová příznivě ovlivňují zánětlivou reakci v organismu, prostřednictvím jejich vlivu na exprese genů asociovaných se zánětlivým procesem. Experiment byl realizován na prasatech krmených dietou s doplňkem rybího oleje a dietou s doplňkem palmového oleje. Určité pokusné skupiny byly navíc stimulovány lipopolysacharidy, který měl navodit rychlý nástup zánětlivé reakce, přičemž nás zajímala především schopnost polynenasycených mastných kyselin n-3 inhibovat tento proces. Já jsem sledoval především změny expresí genů pro receptory adiponektinu AdipoR1 a AdipoR2, jakož i exprese u dalších genů souvisejících se zánětlivým procesům LBP; ICAM1; IL-6; TNFalfa; IL-12. Při zpracování výsledků z odebraných vzorků jater a tukové tkáně bylo použito stanovení exprese vybraných genů pomocí QRT-PCR. Výsledky expresí genů jsem statisticky vyhodnotil a zobrazil ve formě grafů. Příznivý prokazatelný vliv rybího oleje byl sledován pouze u genu ADIPOR2 v játrech, u skupiny nestimulovaných lipopolysacharidy (P <0.05). U ostatních genů jsme nezaznamenali žádný prokazatelný vliv rybího oleje na modulaci zánětu u prasat. Z výsledků experimentu, ale víme vyvodit příčiny neúspěchu a v dalších studiích bychom mohli být schopni hypotézu potvrdit.
|
|
|
Vliv váhového úbytku obézních subjektů na senzitivitu buněk tukové tkáně vůči stresu endoplazmatického retikula.
Karlická, Michaela ; Rossmeislová, Lenka (vedoucí práce) ; Němcová, Vlasta (oponent)
Adipocytokiny uvolňované tukovou tkání hrají důležitou roli v regulaci imunitních a zánětlivých reakcí. Při obezitě dochází k dysregulaci jejich produkce, což je jeden z hlavních faktorů podílejících se na navození chronické systemické zánětlivé reakce nízkého stupně, která představuje rizikový faktor pro rozvoj nemocí jako je ateroskleróza nebo diabetes typu 2. Hlavním cílem této práce bylo porovnat sekreci vybraných adipocytokinů (adiponektin, IL6 a MCP1) in vitro diferencovanými adipocyty odvozenými z tukové tkáně před a po dietní intervenci a to v bazálních podmínkách a během stimulované lipolýzy. U adiponektinu byla též analyzována sekrece jeho izoforem. Koncentrace adiponektinu, IL6 a MCP1 byla stanovena pomocí metody ELISA, k určení distribuce izoforem adiponektinu byla použita metoda Western Blot. Dále byla pozornost věnována genové expresi ATF3, ATF4 a HSPA5, faktorů účastnících se stresu ER, v průběhu diferenciace adipocytů. Změny genové exprese byly měřeny metodou kvantitativní Real Time PCR. Zároveň byl rozvoj endoplazmatického retikula v průběhu adipogeneze monitorován pomocí nepřímé imunofluorescence. Změny sekrece adipocytokinů (adiponektin, IL6 a MCP1) v důsledku samotné dietou navozené váhové redukce nebyly prokázány. β adrenergní stimulace způsobila redukci sekrece adiponektinu a...
|
|
| |
|
|
Vliv polynenasycených mastných kyselin n-3 na markery zánětu u modelového organizmu
Pešková, Petra
Cílem této práce bylo ověřit hypotézu, že n-3 polynenasycené mastné kyseliny potlačují rozvoj mírného chronického zánětu. Experiment probíhal na potkanech krmených rozdílnými dietami (kontrolní, s přídavkem oleje ze světlice barvířské, rybího oleje a oleje z řasy Schizochytrium). Při zpracování výsledků z odebraných tkání bylo použito stanovení exprese vybraných genů pomocí qRT-PCR, zjištění zastoupení proteinů v cytosolu a jaderné frakci pomocí Western-blotu a kvantifikace cytokinů ELISA metodou. Podávání oleje z řasy Schizochytrium vedlo ke snížení konečné hmotnosti a glykémie, dále ke zvýšení exprese PPAR-gama a zvýšené produkci protizánětlivých cytokinů IL-10 a TGF-beta1. Naopak nebyl pozorován rozdíl v expresi GPR120 a receptorů pro adiponektin ani v množství proteinů NF-kappaB a PPAR-gama mezi jednotlivými dietami. Byla zjištěna zvýšená plazmatická koncentrace adiponektinu. Z výsledků experimentu vyplývá, že je možné doporučit olej z řasy Schizochytrium jako vhodný doplněk humánní stravy jako prevence vzniku chronických degenerativních onemocnění.
|
|
|
Stanovení biologické aktivity rekombinantního proteinu adiponektinu pomocí buněčné kultury
Pernicová, Iva ; Rittich, Bohuslav (oponent) ; Ševčík, Mojmír (vedoucí práce)
Tato diplomová práce se zabývá stanovením biologické aktivity rekombinantního proteinu adiponektinu pomocí buněčné kultury. Nejprve bylo důležité zvládnout práci s buněčnými kulturami konkrétně s linií 3T3-L1. Na základě proliferačních testů byla vybrána koncentrace inaktivovaného séra, která byla používána pro všechny další experimenty. V proliferačním testu byla ověřena stimulace růstu buněk pomocí růstových faktorů HB-EGF, PDGF-BB a bFGF v různých koncentracích. Biologická aktivita adiponektinu poté byla stanovena jako inhibice stimulace růstu s 5 ng/ml PDGF-BB. Test biologické aktivity adiponektinu byl také proveden s lyofilizovaným adiponektinem a růstovým faktorem bFGF (0,1 ng/ml). Lyofilizace neměla vliv na biologickou aktivitu adiponektinu.
|
|
|
Využití flowcytometrie pro multiplexové analýzy v klinické biochemii
Babušíková, Lucie ; Tremlová,, Bohuslava (oponent) ; Beňovská,, Miroslava (vedoucí práce)
Diplomová práce pojednává o technice flow cytometrie pro multiplexové analýzy a jejím využitím ve spojení s imunochemickými metodami. V rámci této práce byla provedena klinická studie, která se zabývá sekundární prevencí infarktu myokardu a aterosklerózy u souboru 186 pacientů. V dnešní době představuje infarkt myokardu celosvětový civilizační problém. Řada možných parametrů pro monitorování aterosklerózy představuje ve světě dosud nevyřešenou problematiku. V praktické části této práce jsme prováděli analýzu pomocí xMAP technologie Luminex u nových parametrů (adiponektin, resistin, osteopontin) předpovídajících aterosklerotické onemocnění ve spojitosti s infarktem myokardu. Také jsme chtěli zjistit, jak se tyto parametry změní u pacientů po zvýšení dávky léčebných medikamentů.
|
host ::
RSS.